बंद बीज बैंक जोखिम को केंद्रित कर देते हैं। जब बाहरी जर्मप्लाज्म का आना बंद हो जाता है, तो चक्रों के साथ आंतरिक रोगजनकों का दबाव चुपचाप बढ़ता रहता है। रूटस्टॉक मदर ब्लॉक्स को सिस्टेमिक वायरोइड्स, अव्यक्त फाइटोप्लाज्मा और बीज जनित बैक्टीरिया का सामना करना पड़ता है, जो परिपक्व पेड़ों को तो नहीं मारते लेकिन अंकुरों के ओज को नष्ट कर देते हैं। प्रतिरोध क्षमता को खत्म होने से रोकने के लिए कठोर नैदानिक दिनचर्या, सख्त छंटाई नियम और अलग रखी गई सीमा के भीतर सक्रिय जनसंख्या प्रबंधन की आवश्यकता होती है।

रूटस्टॉक प्रजनन लाइनें अनुमानित प्रतिरोध जीनों पर निर्भर करती हैं। जब कोई लक्षित रोगजनक एक बंद प्रणाली के भीतर उत्परिवर्तित होता है, तो चयन दबाव आपके विरुद्ध हो जाता है। इसके प्रबंधन के लिए दोहरे नियंत्रण की आवश्यकता होती है: मदर ऑर्चर्ड के फेनोटाइपिक स्वास्थ्य का सत्यापन करना और स्तरीकरण से पहले प्रत्येक बीज लॉट के माइक्रोफ्लोरा की जांच करना। बंद परिस्थितियों में स्वच्छ, प्रतिरोधी रूटस्टॉक बीज लाइनों को बनाए रखने के लिए परिचालन प्रोटोकॉल यहां दिया गया है।

मदर ट्री ऑर्चर्ड के लिए रोग जांच मानदंड

प्रत्येक विकास चक्र में मदर ट्री की तीन बार जांच करें। पत्तियां फूटने, गर्मियों के मध्य में वृद्धि रुकने और पत्तों के झड़ने से पहले के समय मूल्यांकन निर्धारित करें। अव्यक्त संक्रमण अलग-अलग फेनोलॉजिकल चरणों में अलग तरह से प्रकट होते हैं, जिससे सिर्फ एक बार की जाने वाली दृश्य जांच अप्रभावी हो जाती है। जिस भी पेड़ में अकारण क्लोरोसिस, अवरुद्ध शीर्ष वृद्धि या छाल में घाव दिखाई दें, उसे तत्काल प्रयोगशाला परीक्षण के लिए चिह्नित किया जाना चाहिए।

रूटस्टॉक ब्लॉक्स पर प्रतिवर्ष आणविक परीक्षण करें। DAS-ELISA जैसे सेरोलॉजिकल परीक्षण उच्च-टाइटर वायरस के लिए काम करते हैं, लेकिन ग्राफ्ट-संचरित रोगजनकों और फाइटोप्लाज्मा के लिए क्वांटिटेटिव रियल-टाइम PCR (qPCR) ही मानक बना हुआ है। प्रति पेड़ आठ पूरी तरह से खुली पत्तियों का नमूना लें, जिसमें कैनोपी की मध्यम ऊंचाई पर प्रत्येक मुख्य दिशा से दो पत्तियां ली जाएं। विश्लेषणात्मक पहचान सीमा से नीचे रोगजनक के डाइल्यूट होने से रोकने के लिए मिश्रित नमूनों में प्रति निष्कर्षण ट्यूब पांच पेड़ों से अधिक नहीं होने चाहिए।

अस्पष्ट नोट्स के बजाय मात्रात्मक मेट्रिक्स के साथ लक्षणों की गंभीरता को दर्ज करें। इंटरनोड की लंबाई, लीफ एरिया इंडेक्स और कैम्बियल मलिनकिरण की गहराई रिकॉर्ड करें। ग्रिड में प्रत्येक पेड़ की स्थिति के लिए 5-वर्षीय डायग्नोस्टिक लेजर बनाए रखें। यदि मिट्टी में नमी की कमी के बिना कोई पेड़ ब्लॉक के औसत की तुलना में वार्षिक प्ररोह विस्तार में 15% की कमी दिखाता है, तो उसके रूट ज़ोन को अलग करें और उसकी बीज कटाई तुरंत रोक दें।

काटे गए बीज बैचों के लिए बैक्टीरियल रोगजनक परीक्षण

परीक्षण से पहले सड़न रोकने वाली परिस्थितियों में बीज निकालें। सतह का रोगाणुनाशन गहरे एंडोफाइट्स या फ्यूनिकुलस में मौजूद बीज-आवरण के बैक्टीरिया को नहीं हटाता है। इंटरनेशनल सीड टेस्टिंग एसोसिएशन (ISTA) के नियमों का उपयोग करके प्रत्येक साफ किए गए बीज लॉट से कार्य नमूने लें: प्रति 50-किलोग्राम कंटेनर से पांच प्राथमिक नमूने निकालें, उन्हें एक समग्र नमूने में मिलाएं, और इसे 1,200 बीजों के परीक्षण एलिक्वॉट तक कम करें।

pH 7.2 पर बाँझ फॉस्फेट-बफर्ड सलाइन (PBS) में एलिक्वॉट के आधे हिस्से को मैसिरेट करें। कुचले हुए ऊतकों को 4 डिग्री सेल्सियस पर 45 मिनट तक भीगने दें ताकि प्रतिस्पर्धी सैप्रोफाइटिक वृद्धि की अनुमति दिए बिना बैक्टीरियल कोशिकाएं निकल सकें। लक्षित रोगजनक के आधार पर किंग बी मीडियम, न्यूट्रिएंट ब्रोथ यीस्ट एक्सट्रेक्ट (NBY), या क्रिस्टल वायलेट पेक्टेट अगर जैसे सेमी-सिलेक्टिव मीडिया पर डाइल्यूशन प्लेटिंग करें।

1. ट्रिट्यूरेशन: ठंडे निष्कर्षण बफर में मैकेनिकल होमोजिनाइज़र का उपयोग करके बीज के छिलकों को कुचलें।
2. सेंट्रीफ्यूजेशन: मोटे मलबे को नीचे बैठाने के लिए होमोजिनेट को 1,000 g पर 5 मिनट तक घुमाएं, फिर सुपरनेटेंट को सुरक्षित रखें।
3. बैक्टीरियल संकेंद्रण: बैक्टीरियल कोशिकाओं को एक ठोस पेलेट के रूप में इकट्ठा करने के लिए सुपरनेटेंट को 8,000 g पर 12 मिनट तक घुमाएं।
4. पुनर्निलंबन: पेलेट को 1.5 मिलीलीटर स्टेराइल सेलाइन घोल में फिर से मिलाएं।
5. आणविक स्क्रीनिंग: सिरिंगोमाइसिन उत्पादक स्यूडोमोनाड्स के लिए syrB जीन या Xanthomonas के लिए hrp जीन क्लस्टर जैसे मानक विषाणु जीनों को लक्षित करते हुए मल्टीप्लेक्स PCR करें।

डाइल्यूशन प्लेट्स को 26 डिग्री सेल्सियस पर 72 घंटों के लिए इनक्यूबेट करें। मैट्रिक्स-असिस्टेड लेजर डिसोर्पशन आयोनाइजेशन टाइम-ऑफ-फ्लाइट (MALDI-TOF) मास स्पेक्ट्रोमेट्री या प्रत्यक्ष 16S-23S rRNA जीन अनुक्रमण के माध्यम से कॉलोनी पहचान की पुष्टि करें। यदि परीक्षण में क्वारंटाइन बैक्टीरियल प्रजातियों का पता चलता है, तो लॉट को तुरंत अस्वीकार कर दें। स्थानिक स्ट्रेन के मामले में, सूखे बीज के वजन के प्रति ग्राम कॉलोनी-फॉर्मिंग यूनिट्स (CFU) की गणना करें। प्रति ग्राम 25 CFU से अधिक बैच संदूषण मदर ब्लॉक में फील्ड उपचार विफलता का संकेत देता है।

छंटाई की सीमा: पूरे जनक ब्लॉक को कब नष्ट करना चाहिए

अलग-अलग पेड़ों को हटाना केवल तभी काम करता है जब संक्रमण स्थानीयकृत हो। सिस्टेमिक रूटस्टॉक रोगजनक प्राकृतिक जड़ ग्राफ्टिंग के माध्यम से भूमिगत रूप से फैलते हैं। 3 मीटर गुणा 5 मीटर से कम दूरी पर लगाए गए ब्लॉकों में, छठे वर्ष तक रूट ग्राफ्टिंग 60% आवृत्ति तक पहुंच जाती है। एक बार जड़ों का जुड़ाव बन जाने के बाद, एक अकेला संक्रमित पेड़ सीधे संवहनी प्रवाह के माध्यम से अपने आसपास के आठ पड़ोसी पेड़ों को भी जोखिम में डाल देता है।

पूरे ब्लॉक के उन्मूलन को ट्रिगर करने के लिए गणितीय सीमाएं लागू करें। यदि ब्लॉक भर में किसी भी एक वार्षिक परीक्षण में वायरल या फाइटोप्लाज्मा का संक्रमण 8% से अधिक हो जाता है, तो चुनिंदा पौधों को हटाना इसके फैलाव को रोकने में विफल रहेगा। पूरे क्षेत्र को नष्ट कर दें। इस धारणा के तहत पेड़ों को बनाए रखना कि लक्षण-रहित पौधे सुरक्षित हैं, आपके स्तरीकरण चक्रों में सबक्लिनिकल संक्रमण को बुलावा देता है।

यांत्रिक रूप से उखाड़कर और उसके बाद जड़ों की पूरी खुदाई करके ब्लॉकों को पूरी तरह समाप्त करें। ज़मीनी स्तर पर तनों को काटने से जड़ प्रणाली जीवित रह जाती है, जो 24 months तक अनिवार्य रोगजनकों को जीवित रखती है। धूप में सुखाने और नष्ट करने के लिए जड़ों के बचे हुए अवशेषों को सतह पर लाने के लिए सिंगल-शैंक रिपर से ज़मीन को 70 centimeters नीचे तक सबसॉइल करें। दोबारा रोपण की योजना बनाने से पहले नेमाटोड घनत्व को मापने के लिए मिट्टी के नमूनों को एक कृषि प्रयोगशाला में भेजें।

बंद प्रजनन पूलों में आनुवंशिक विविधता बनाए रखना

बंद प्रणालियों में तेज़ी से इनब्रीडिंग डिप्रेशन और द्वितीयक प्रतिरोध कारकों के नुकसान का जोखिम होता है। केवल एक विशिष्ट रोगज़नक़ के प्रतिरोध के लिए जनकों का चयन करने से आमतौर पर पूल सीमित हो जाता है, जिससे बाद की पीढ़ियां नए म्यूटेशन या द्वितीयक कीटों के प्रति संवेदनशील हो जाती हैं। प्रति रूटस्टॉक लाइन में कम से कम 45 breeding parents का न्यूनतम प्रभावी जनसंख्या आकार (Ne) बनाए रखें, और यह सुनिश्चित करें कि यदि फसल डायोइकियस है तो लिंग अनुपात समान हो, या मोनोइकियस और उभयलिंगी फसलों में मातृ जनकों का समान योगदान हो।

ओपन-पॉलिनेटेड मास चयन के बजाय चक्रीय संभोग (रोटेशनल मेटिंग) प्रणाली लागू करें। सर्कुलर ब्रीडिंग मैट्रिक्स का उपयोग करें जहां Parent A का क्रॉस Parent B से, Parent B का Parent C से, और आगे बढ़ते हुए अंतिम क्रॉस वापस Parent A से जुड़े। यह डिज़ाइन ज्ञात प्रमुख प्रतिरोध लोकी को कई मातृ रेखाओं में वितरित करते हुए समान-वंशानुगत एलील के संचय को कम करता है।

अपने एक्सेशन रजिस्टर में सह-पूर्वजता गुणांक (को-एंसेस्ट्री कोएफिशिएंट) को ट्रैक करें। यदि वंशावली विश्लेषण से पता चलता है कि बंद पूल का औसत रिश्तेदारी गुणांक 0.125 से ऊपर जा रहा है, तो समूह को three समानांतर उप-आबादी में विभाजित करें। प्रत्येक उप-आबादी को स्वतंत्र रोगज़नक़ चुनौती लाइनों के अधीन करें। जब उप-आबादी one में प्रतिरोध समाप्त हो जाए, तो हाइब्रिड विगर को पुनर्स्थापित करने और लाइन में पूरक मल्टी-लोकस प्रतिरोध को फिर से शामिल करने के लिए इसे उप-आबादी two के साथ क्रॉस करें।

द्वितीयक सुविधाओं में पैतृक अतिरिक्त लाइनों को सुरक्षित रखें। मुख्य बीज उत्पादन क्षेत्रों से कम से कम 15 kilometers दूर स्थित एक अलग सैटेलाइट सुविधा में प्रति एक्सेशन ten वानस्पतिक क्लोन वाले डुप्लिकेट संग्रह रखें। यदि कोई आक्रामक रोगज़नक़ प्राथमिक स्थल पर पूरे बगीचे को नष्ट करने के लिए मजबूर करता है, तो बंद पूल अनियंत्रित बाहरी जीनों को शामिल किए बिना स्वच्छ सैटेलाइट रिजर्व से पुनर्जीवित हो सकता है।

कटाई के औजारों और बीज धोने वाले उपकरणों के लिए स्वच्छता प्रोटोकॉल

यांत्रिक कटाई और बीज धोने से बैक्टीरिया और वायरस कीट वाहकों की तुलना में तेज़ी से फैलते हैं। हैंड प्रूनर्स, मैकेनिकल शेकर्स, फल काटने वाले यंत्रों और पल्प निकालने वाली मशीनों को प्रमाणित रसायनों से सैनिटाइज किया जाना चाहिए। क्वाटरनेरी अमोनियम यौगिकों, क्लोरीन डाइऑक्साइड और हीट ट्रीटमेंट को सटीक संपर्क समय और सक्रिय घटक सांद्रता के लिए कैलिब्रेट किया जाना चाहिए।

प्रूनर्स और कटाई की कैंची को अलग-अलग पेड़ों के बीच कम से कम 60 seconds के लिए घरेलू ब्लीच के 20% घोल (लगभग 1.05% sodium hypochlorite देने वाला) या टर्शियरी एमाइलफेनॉल के 2.5% घोल में डुबो कर रखना आवश्यक है। केवल एक पल के लिए डुबोने पर निर्भर न रहें; रोगज़नक़ को पूरी तरह निष्क्रिय करने के लिए जैविक परतों को पर्याप्त संपर्क समय की आवश्यकता होती है। कीटाणुशोधन से पहले काटने वाली सतहों से जैविक रस को पोंछकर साफ करें, क्योंकि पौधों का राल क्लोरीन को तेजी से बांधता है और ऑक्सीकरण क्षमता को कम करता है।

बीज लॉट के बीच बीज डीपल्पर्स और वाशिंग फ्लूम्स को तीन-चरणीय परिशोधन चक्र से गुजारें:

1. यांत्रिक धुलाई: 60 degrees Celsius और 120 bar दबाव पर दिए गए उच्च-दबाव वाले पानी का उपयोग करके पौधों की शर्करा, म्यूसिलेज और कुचले हुए छिलकों को हटा दें।
2. डिटर्जेंट स्क्रब: सभी स्टेनलेस स्टील ऑगर, स्क्रीन और रबर बेल्ट पर एक औद्योगिक क्षारीय फोम क्लीनर (pH 11.0 to 12.0) लगाएं। जैविक अवशेषों को घोलने के लिए 15 minutes का समय दें।
3. ऑक्सीडाइजिंग रिंस: सभी सतहों को 200 parts per million पेरासिटिक एसिड घोल से धोएं। 10 minutes तक गीला संपर्क बनाए रखें, फिर ताजे पानी से धोए बिना उपकरणों को हवा में सूखने दें।

ऑक्सीकरण-कमी क्षमता (ORP) मीटर से रासायनिक वॉश बेसिन की निगरानी करें। वॉटर बाथ में ORP मान लगातार 750 millivolts से ऊपर बनाए रखें। यदि जैविक भार ORP को 680 millivolts से नीचे ले जाता है, तो टैंक खाली करें, जलाशय को धोएं और सैनिटाइज़र का नया बैच तैयार करें। गहरे कुएं में छोड़ने या खेत में निपटान से पहले पर्यावरणीय अनुपालन के लिए अपशिष्ट जल का परीक्षण करें।

सामान्य गलतियां

पूरी तरह से केवल देखकर स्वास्थ्य जांच पर निर्भर रहना। लक्षण-रहित वाहक पेड़ पूरी तरह स्वस्थ दिखने के बावजूद अपने भ्रूणों में उच्च वायरल लोड स्थानांतरित कर देते हैं। प्रयोगशाला परीक्षण के बिना किसी भी जनक पेड़ को कभी भी सुरक्षित न मानें।

गंदे औजारों पर अल्कोहल वाइप्स का उपयोग करना। 70% सांद्रता वाला इथेनॉल पौधों के प्रोटीन को नष्ट करने के बजाय उन्हें धातु की सतहों पर चिपका देता है, जिससे बैक्टीरियल स्पोर्स के लिए सुरक्षात्मक जगह बन जाती है। सैनिटाइज करने से पहले पौधों के अवशेषों को एल्कलाइन साबुन से साफ करें।

पीक एक्सट्रैक्शन के दौरान बीजों के समूहों को मिलाना। धुलाई तेज करने के लिए पास की पंक्तियों से बीजों की छोटी उपज को मिलाना ट्रेस-बैक जांच को नुकसान पहुंचाता है यदि बैक्टीरियल टेस्ट फेल हो जाते हैं। पेड़ों की प्रत्येक पंक्ति का एक अलग हार्वेस्ट आइडेंटिफिकेशन कोड होना चाहिए।

जड़ों से फैलने वाले संक्रमण के जोखिम को कम आंकना। रोगग्रस्त पौधों को हटाने के बाद उनके ठूंठ को जमीन में छोड़ना भूमिगत वैक्टर बनाता है। यदि आप ऊपरी कैनोपी को हटाते हैं, तो रूट एक्सट्रैक्टर का उपयोग करके पूरे जड़ क्षेत्र को भी बाहर निकालें।

पानी की जांच को अनदेखा करना। लगातार सैनिटाइज किए बिना फ्लूम पानी का फिर से उपयोग करने से बीज एक्सट्रैक्शन के पूरे दिन Phytophthora और Pseudomonas समान रूप से फैल जाते हैं। डायरेक्ट इनलाइन डोजिंग सिस्टम स्थापित करें।

व्यावहारिक अगले कदम

मौजूदा मदर ब्लॉक इन्वेंटरी का तुरंत ऑडिट करें। पिछले 24 महीनों के एक्सट्रैक्शन रिकॉर्ड निकालें और उन मूल पेड़ों की पहचान करें जिनका PCR टेस्ट छूट गया था। उनकी स्थिति सत्यापित होने तक उन्हें आने वाली फसल से बाहर रखने के लिए चिह्नित करें।

टिश्यू फ्लश से काफी पहले विशेष डायग्नोस्टिक प्राइमर्स और एक्सट्रैक्शन किट ऑर्डर करें। यदि इन-हाउस qPCR उपकरण कैलिब्रेटेड नहीं है, तो किसी मान्यता प्राप्त फाइटोसैनिटरी टेस्टिंग लैब से संपर्क करें। अपने बीज प्रसंस्करण उपकरणों पर सभी इनलाइन डोजिंग पंपों को कैलिब्रेट करें, और उन कुंद धार वाले कटाई औजारों को बदलें जो मदर स्टॉक पर खुरदरे कट छोड़ते हैं।

सख्त आंतरिक क्वारंटीन सीमाएं स्थापित करें। ब्लॉकों के बीच मशीनरी की आवाजाही को नियंत्रित करें, ग्रीनहाउस के प्रवेश द्वारों पर बूट सैनिटाइजिंग स्टेशन लगाएं, और फील्ड कर्मियों को हर एक पेड़ के बाद औजारों को सैनिटाइज करने का प्रशिक्षण दें।